Berthold Maria Schenk Graf von Stauffenberg wurde am 15. März 1905 in Stuttgart, Deutschland, geboren. Er stammte aus einer adligen Familie und war der jüngere Bruder des bekannten deutschen Widerstandskämpfers Claus Schenk Graf von Stauffenberg.
Berthold von Stauffenberg schloss sein Studium der Rechtswissenschaften ab und trat 1925 in den bayerischen Justizdienst ein. Später wechselte er in den diplomatischen Dienst und trat 1932 dem Auswärtigen Amt bei. Dort arbeitete er unter anderem in der deutschen Botschaft in London.
Während des Zweiten Weltkriegs war Berthold von Stauffenberg als Oberleutnant der Reserve in der deutschen Wehrmacht tätig. Obwohl er nicht direkt an den Planungen des Attentats auf Adolf Hitler am 20. Juli 1944 beteiligt war, sympathisierte er mit dem Widerstand und hatte enge Kontakte zu den Verschwörern.
Nach dem Scheitern des Attentats wurde Berthold von Stauffenberg verhaftet und vom Volksgerichtshof unter Roland Freisler verurteilt. Am 10. August 1944 wurde er im Zuchthaus Brandenburg-Görden hingerichtet.
Berthold von Stauffenberg hinterließ seine Frau Maria-Theresa Gräfin von Hardenberg und vier Kinder.
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